Reporte: Extraccin del ADN de chcharos

2. Diseño
   

Título: “Extracción del ADN de chícharos”

Objetivo: Aislar el ADN de chícharos utilizando 2 jabones líquidos diferentes para comparar su efectividad en la extracción de éste.

Variables:

• Dependiente: la cantidad de ADN extraído
• Independiente: el tipo de jabón (de manos o de trastes)
• Controladas: la marca de los jabones (Axión y Palmolive) , la temperatura, el tipo de ADN (chícharos).
  

Material:

• Parrilla de calentamiento
• Cápsula de porcelana
• Espátula
• Embudo de vidrio
• 4 vasos de precipitado de 100 ml
• 2 tubos de ensaye
• Probeta de 50 ml.
• Vaso de precipitado de 10 ml
• Agitador de vidrio
• Pipetas
• Mortero grande con pistilo
• Regla
• 50 g de chícharos
• 10 ml de jabón de manos (Palmolive de coco)
• 10 ml de jabón de trastes (Axión azul)
• 3 g de NaCl (sal)
• 10 ml de etanol frío
• 1 g de ablandador de carne
• Hielo
• 1 gasa
• 30 ml de agua destilada

Ingredientes de los jabones:

• Manos (Palmolive):

• Agua
• Sulfato de sodio
• Cloruro de sodio
• Aceite
  

• Trastes (Axión):

• Agua
• Tensoactivos aniónicos
• Reguladores de PTT
• Tensoactivo anfotérico
• Perfume
• Colorante
• Conservadores
• Secuestrante
• Vinagre
• Cloroxilenol

Procedimiento:
*Las medidas en gramos tienen una incertidumbre de .05 g y las medidas en mililitros tienen una incertidumbre de .1 ml.

1. En la parrilla de calentamiento, ponga agua y deje que se caliente a 40º C
2. En un vaso de precipitados de 100 ml disuelva 1 g de NaCl en 30 ml de agua destilada, añada 3.5 ml de jabón líquido para manos con una jeringa y agite vigorosamente.
3. Pese utilizando la cápsula de porcelana 15 g (±.1 g) de chícharos y macérelos en un mortero. Añada la pulpa de éstos al vaso con la solución recién preparada en el punto 1.
4. Repita estos dos pasos en otro vaso de precipitado pero esta vez utilice jabón para trastes.
5. Coloque los vasos 15 minutos en el agua previamente calentada a 20º C.
6. Enfríe las mezclas colocándolas en un baño de agua con hielo por 5 min agitando constantemente.
7. Filtre las mezclas a un segundo vaso de precipitado a través de una gasa, asegúrese que no pase espuma al filtrado.
8. En un tubo de ensaye coloque 10 ml de cada uno de los extractos recién filtrados y añada 1 g de ablandador. Coloque los tubo por 5 min. en un baño de agua a temperatura de 30-40°C.
9. Vierta cuidadosamente a través de la pared de los tubos de ensaye, 10 ml de etanol frio (en cada uno) para formar una capa por encima de los extractos de chícharos.
10. Deje los tubos sin mover durante unos minutos mientras los ácidos nucleicos se alojan en la capa superior (etanol).
11. Decante, cuidadosamente, la capa con AND.
12. Mida con una regla la cantidad de ADN obtenido con cada uno de los jabones líquidos.
    
    
    

3. Obtención de datos brutos

Tabla #1: “Medidas de los ADN extraídos”

*Los datos en negritas son los de mi equipo.

4. Procesamiento de datos

• Media:

• Fórmula: Suma de todos los datos/número de datos
• Ejemplo numérico: (1.2+1.2+1.1+1.2+1.2+1.5)/6 = 1.23
  

• Desviación estándar:

• Fórmula: √Σ(x-x) / (n-1)
• Ej: √(1.23-1.2)/(6-1) + √(1.23-1.2)/(6-1) + √(1.23-1.1)/(6-1) + √(1.23-1.2)/(6-1) + √(1.23-1.2)/(6-1) + √(1.23-1.5)/(6-1) = .14
  

• T-student:

• Fórmula:

 

• Ejemplo numérico: |1.23-1.73|/ (√.0196/6 + .0361/6) = 5.19

• Grados de libertad:

• Fórmula: (Na+Nb)-2
• Ejemplo numérico: (6+6)-2=10
  

* Se utilizó hoja de cálculo para obtener la t-student

• Ho: No hay diferencia significativa entre la cantidad de ADN extraída por el jabón de trastes y el jabón de manos.
• Ha: Hay diferencia significativa entre la cantidad de ADN extraída por el jabón de trastes y el jabón de manos.
• T-student=5.19
• Grados de libertad=10
• Valor crítico=2.23
• Ho se rechaza.

5. Conclusión y evaluación

A partir de los datos brutos obtenidos y del procesamiento de estos se puede concluir a partir de una prueba de t-student que sí hay diferencia significativa entre la cantidad de ADN extraído por medio del jabón líquido de manos y por medio del jabón líquido de trastes. Como es muy evidente al sacar las medias de ambos grupos de datos el jabón líquido para las manos extrae más ADN que el de trastes. Los datos son muy significativos ya que ambas desviaciones estándar son mínimas (tabla #2) porque los datos no se encuentran muy alejados de la media.

Así pues, después de haber concluido que es más el ADN extraído con el jabón de manos lógicamente sus componentes, o ingredientes, son los que más tienen la capacidad de disolver la bicapa lipídica que rodea a la célula. Estos ingredientes son el sulfato y el cloruro de sodio.

Para mejorar la práctica realizada se recomendaría sacar más datos para que de esta manera sea más preciso. Al realizar la práctica la temperatura en la que se colocaron los vasos de precipitados en dos pasos del experimento no era exacta, a los primeros vasos les tocó una temperatura más alta de la que debió haber sido y a los últimos les tocó una temperatura inferior.

Para mejorar la práctica, se recomienda realizarla con más tipos de jabones para que haya más referencias. Las medidas de los pesos de la sal y del ablandador de carne no son tan precisas ya que las balanzas utilizadas son muy viejas y por lo tanto no tan acertadas.

Bibliografía:

ChileCientífico. (2008). Extracción de ADN. Retrieved noviembre 27, 2012 a las 5:42 pm, from http://www.chilecientifico.cl/ciencia-divertida-informacion-general-103/187-extraccion-de-adn.html.

University of Utah. (2011). Cómo extraer ADN de cualquier cosa viviente. Retrieved noviembre 27, 2012 a las 7:57 pm, from Learn.Genetics: http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/

Albas, Ma. del Sagrario (2012). Ácidos nucleicos. Recuperado en noviembre 27 de 2012 a las 6:37 pm.

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